Medio de cultivo frecuentemente usado en
microbiología de alimentos para la diferenciación de enterobacterias, en base a
la fermentación de glucosa y lactosa, y a la producción de ácido sulfhídrico.
Fundamento
En el medio de cultivo, la peptona de carne y la tripteína, aportan los
nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano. La lactosa y la glucosa son
los hidratos de carbono fermentables. El tiosulfato de sodio es el sustrato
necesario para la producción de ácido sulfhídrico, el citrato de hierro y
amonio, es la fuente de iones Fe 3+, los cuales se combinan con el
ácido sulfhídrico y producen sulfuro de hierro, de color negro. El rojo
de fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el balance
osmótico. El agar es el agente solidificante.
Por fermentación de azúcares, se producen ácidos, que se detectan por medio del
indicador rojo de fenol, el cual vira al color amarillo en medio ácido. El
tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrógeno el que reacciona luego con
una sal de hierro proporcionando el típico sulfuro de hierro de color negro.
Siembra
A partir de un cultivo puro del microorganismo
en estudio, sembrar el medio de cultivo, picando el fondo y extendiendo sobre
la superficie del medio.
Incubación
A 35-37°C
durante 24 horas, en aerobiosis.
Resultados
Pico alcalino/fondo ácido (pico rojo/fondo
amarillo): el microorganismo solamente fermenta la glucosa.
Pico ácido/fondo ácido (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganismo fermenta
glucosa, y lactosa.
Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo es no
fermentador de azúcares.
La presencia de coloración amarilla nos indica
fermentación de carbohidratos, aunque sea sólo de glucosa (si el otro extremo
es rojo) y esta función metabólica es típica de anaerobios facultativos.
La bacteria puede reducir el SO4 (sulfato
ferroso) a H2S (ácido sulfhídrico), este se
combinará con el Fe (hierro) para formar FeS (sulfuro de hierro)
el cual proporciona un aspecto negro al extremo inferior. La producción de gas
dentro del agar provocará grietas, burbujas o desplazamiento del mismo hacia
arriba.
Interpretación de resultados
Se debe
examinar la parte superior e inferior del medio y valorar la coloración
a)
En el extremo superior
Rojo.- No fermentan lactosa, sacarosa o ambas.
Amarillo.- Fermenta lactosa, sacarosa o ambas.
Explicación: El color amarillo indica un pH bajo debido a
la producción de ácidos en grandes cantidades por la fermentación de la lactosa
y/o sacarosa. Si la bacteria no fermenta lactosa y/o sacarosa la
producción de ácidos es nula o, en caso de las enterobacterias, mínima (ya que
todas fermentan la glucosa, generando ácidos en pequeñas
cantidades) aunque no lo suficiente para contrarrestar la alcalinidad del
medio, la cual se manifiesta con un intenso color rojo.
b) Extremo inferior.
Rojo.- Sin fermentación, la bacteria es un aerobio obligado.
Amarillo.- Fermentación, la bacteria es un aerobio facultativo.
Negro.- Producción de H2S.
Grietas, burbujas o elevación del
medio.- Producción de gas.
Explicación: La coloración sigue el mismo patrón, indicando el pH
en base a la fermentación de carbohidratos. La presencia de un color rojo a
este nivel, no sólo nos dice que la bacteria no fermenta lactosa y sacarosa,
además es indicativo de que no fermenta glucosa y por tanto necesita oxígeno
para oxidar éstos carbohidratos y obtener energía de ellos, siendo así un
microorganismo aerobio obligado.
La presencia de burbujas, o ruptura del medio de cultivo, indica que el
microorganismo produce gas.
El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce ácido
sulfhídrico.
