CITRATO DE SIMMONS
El
citrato de sodio es una sal del ácido cítrico, un compuesto orgánico simple que
constituye uno de los metabolitos del ciclo de los ácidos tricarboxilicos.
Generalmente los microorganismos que emplean el citrato como única fuente de
carbono, utilizan sales de amonio como única fuente de nitrógeno. El
metabolismo del citrato realizado, por algunas bacterias se realiza por el
ciclo de Krebs y requiere el desdoblamiento del citrato por la enzima citritasa
(citrato-oxalacetato-liasa o citrato desmolasa) en presencia de magnesio o manganeso y de transportadores
como citrato permeasas.
La
citritasa actúa sobre el citrato produciendo ácido oxalacetico y acetato;
productos que son convertidos enzimáticamente a piruvato y dióxido de carbono.
Durante esta reacción el medio comienza a alcalinizarse por el CO2 que
se genera, el cual se combina con el agua y el sodio para formar Carbonato un
producto alcalino, este carbonato da la alcalinidad que produce el cambio de
color del indicador de pH del medio de verde a azul Prusia oscuro (indicador:
azul de bromo timol, amarillo a pH< de 6.0 y azul a pH > de 7.6). El
medio incluye citrato como única fuente de carbono y fosfato de amonio como
única fuente de nitrógeno.
Técnica
Inocular
el tubo con agar citrato de Simmons realizando siembra por estría tomando una
colonia del microorganismo en estudio. Incubar a 37 grados C por 24 horas.
Interpretación
El
desarrollo de un color azul intenso en
24-48 horas indica una prueba positiva y revela que el microorganismo en
estudio ha sido capaz de utilizar el citrato en el medio con la formación de
productos alcalinos. La prueba también es positiva en ausencia de color azul si
existe crecimiento del microorganismo a lo largo de la estría de inoculación.
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