FIJACIÓN Y TINCIÓN DE LA MUESTRA.

Colorantes.

Son compuestos, orgánicos que contienen radicales cromóforos estos producen color y grupo de auxocromos que forman sales los grupos nitrito (-NO₂) y azo (-N = N) son cromóforos. Los radicales hidroxilo (-OH) y amino (-NH₂) son grupos auxocromos. Los cromóforos imparten la propiedad cromógena al colorante y los auxocromos permiten que el colorante se una con la fibra o tejido.

Un auxocromo es un grupo funcional que no absorbe por si solo en la región del ultravioleta pero que tiene los efectos de desplazar picos de los cromóforos hacia longitudes de onda larga además de aumentar sus intensidades.

Muchos de estos grupos o radicales, son ácidos y bases que originan colorantes ácidos y básicos, y que fijan eficazmente el colorantes. Ejemplo de Composición química del colorante amarillo 2G

 

Algunos ejemplos de auxocromos son:

Ácidos: -COOH, -OH, -SO₃H.

Básicos: -NHR, -NR₂ , -NH₂

Colorante es una  sustancia capaz de absorber determinadas longitudes de onda de espectro visible. Los colorantes son sustancias que se fijan en otras sustancias y las dotan de color de manera estable ante factores físicos/químicos como por ejemplo: luz, lavados, agentes oxidantes.

Un colorante es una sustancia que es capaz de teñir las fibras vegetales y animales. Los colorantes se han usado desde  tiempos más remotos, empleándose para ello diversas materias procedentes de vegetales (cúrcuma, índigo natural, etc.) y de animales (cochinilla, moluscos, etc.) así como distintos minerales.

Desde las primeras civilizaciones el hombre usó materias colorantes naturales. Los pigmentos o sustancias coloreadas se extraían de plantas, animales y minerales. Estas materias eran empleadas para teñir ropas, pintar las pieles y fabricar objetos religiosos y recreativos.

En el año 1856 se inició la era de los colorantes sintéticos, a partir del descubrimiento de William Henry Perkin (1838 - 1907), quién logró obtener el colorante púrpura por oxidación de la anilina con ácido crómico.

La preparación y la tinción de la muestra en microscopía óptica

      Aumenta la resolución de una imagen, acentúa las características morfológicas, conserva la muestra.

La Preparación (fijación) es el proceso mediante el cual se procesan y fijan en su posición las estructuras internas y externas de la célula. Además se elimina el microorganismo y se puede fijar firmemente al portaobjetos.

Fijación por el calor.

·       Preserva la morfología general, pero no a las estructuras internas 

      Fijación química.

·   Protege la subestructura fina  y la morfología de los microrganismos delicados y tenemos como ejemplo de estas sustancias: aldehídos (formaldehido, glutaraldehido, acroleína), ácido ósmico, tetróxido de osmio, compuestos mercúricos y crómicos, alcoholes, acetona etc.

 Colorantes

·    Hacen más visibles las estructuras internas y externas aumentando el contraste con el fondo y   presentan dos características fundamentales que hacen que se dividan en dos grupos..

a  Grupos cromóforos

a)Grupos químicos con dobles enlaces conjugados.

b)Dan al colorante su color.

b  Grupos que tienen gran afinidad por los componentes celulares

Se unen mediante enlaces iónicos(los más comunes), covalentes o hidrófobos.

                                                                

                                                            Tipos de tinción.

Tinción. En esta se emplea un solo colorante. Se dividen en dos clases por lo general.

1.       Colorantes básicos se emplean frecuentemente, tiene las características de tener cargas positivas  y pueden ser: Cristal violeta, Fucsina básica, Verde malaquita.

2.       Colorantes ácidos se emplean con menor frecuencia, tienen la característica de tener carga negativa y pueden ser; Fucsina ácida, Eosina.

Tinción diferencial

Se emplean dos o más colorantes y presenta la siguiente característica.

Divide las bacterias en grupos diferentes según sus propiedades de tinción: ejemplo tinción de Gram;  tinción ácido alcohol resistente.

  

A- Tinción de Gram es la tinción diferencial más empleada, divide a las bacterias en grupos diferentes según diferencias en la pared celular.


Este es uno de los temas a evaluar según fecha programada.